Что будет если принять литий
Развитие хронической болезни почек на фоне применения препаратов лития и антиконвульсантов
Препараты лития часто используются для лечения биполярных расстройств. Однако существует противоречивое мнение о взаимосвязи между длительной терапией препаратами лития и риском развития хронической болезни почек (ХБП).
Цель исследования
Сравнить риск развития ХБП, в частности, терминальной стадии, среди пациентов, получающих препараты лития, антиконвульсанты и другие лекарства для лечения биполярных расстройств.
Материалы и методы
Датское национальное популяционное исследование включало 2 когорты. Первая когорта состояла из 1,5 миллиона индивидуумов, зарегистрированных на 1 января 1995 года, среди которых были отобраны лица, у которых был диагностирован маниакальный эпизод или биполярное расстройство (n =10 591), и все пациенты, получающие литий (n = 26 731) или антиконвульсанты (n=420 959). Вторая когорта включала подгруппу из 10 591 пациента с диагностированным биполярным расстройством
Результаты
У 14 727 (0.8%), 18 762 (1.0%) и 3407 (0.2%) в когорте 1 и 278 (2.6%), 319 (3.0%) и 62 (0.6%) в когорте 2 была диагностирована предполагаемая ХБП, точно установленная ХБП и терминальная стадия ХБП (длительный диализ или трансплантация почки), соответственно.
Применение препаратов лития было ассоциировано с повышением риска установленной ХБП (0 назначений: HR=1.09, 95% CI, 0.81-1.45; ≥60 назначений: HR=3.65, 95% CI, 2.64-5.05) и предполагаемой ХБП (0 назначений: HR=1.01, 95% CI, 0.79-1.30; ≥60 назначений: HR=2.88, 95% CI, 2.17-3.81), в то время как использование антиконвульсантов, антипсихотиков и антидепрессантов не повышало риск развития ХБП. Ни применение препаратов лития, ни других лекарств не было ассоциировано с повышением риска развития терминальной стадии ХБП.
У пациентов с биполярными расстройствами использование лития приводило к повышению риска развития точно установленной ХБП (1-2 назначения: HR=0.89, 95% CI, 0.39-2.06; ≥60 назначений: HR=2.54, 95% CI, 1.81-3.57) и предполагаемой ХБП (1-2 назначения: HR=1.26, 95% CI, 0.65-2.43; ≥60 назначений, HR=2.48, 95% CI, 1.80-3.42), так же как и назначение антиконвульсантов (точно установленная ХБП, 1-2 назначения: HR=1.23, 95% CI, 0.76-1.99; ≥60 назначений, HR=2.30, 95% CI, 1.53-3.44; предполагаемая ХБП, 1-2 назначения: HR=1.11, 95% CI, 0.70-1.76; ≥60 назначений: HR=1.97, 95% CI, 1.34-2.90).
У больных с биполярными расстройствами применение лития не было ассоциировано с повышением риска развития терминальной стадии ХБП, тогда как использование антиконвульсантов было (30-39 назначений: HR=3.23, 95% CI, 1.26-8.27; ≥60 назначений: HR=2.06, 95% CI, 0.82-5.16).
Источник : Lars Vedel Kessing; Thomas Alexander Gerds; Bo Feldt-Rasmussen; Per Kragh Andersen; Rasmus W. Licht. Use of Lithium and Anticonvulsants and the Rate of Chronic Kidney DiseaseA Nationwide Population-Based Study. JAMA Psychiatry. 2015; 72(12): 1182-1191.
Что будет если принять литий
Для профилактического лечения солями лития выбираются больные, у которых болезнь протекает с частыми фазами1 раз в год и чаще. Иногда, если проявления депрессии и мании очень выражены и опасны, имеет смысл назначить длительный прием лития даже при более редких фазах (1 раз в 3 года). Профилактика начинается обычно после того, как закончится депрессивная фаза, или является продолжением лечения маниакального состояния. Результаты оказываются лучшими, если профилактика начата тогда, когда состояние больного позволяет ему сознательно отнестись к назначению лития на долгий срок. Это обеспечит регулярный прием и выполнение необходимых анализов. По данным L. Smigan (1985), неуспех профилактики часто зависит от перерывов в приеме, самовольном снижении доз. Он ссылается на исследования, которые выявили 20 30,% больных, пропускающих прием или вовсе бросающих лечение вопреки совету врача.
Оценивая результаты профилактики солями лития в нашей группе больных, мы получили результаты, совпадающие с данными других исследователей: положительный эффект был отмечен у 2/3 больных.
Профилактическое лечение солями лития нами было начато с 1967 г., под постоянным контролем находилась группа в 350 больных. Из них 250 имели достаточно длительный и подробный анамнез заболевания за период, предшествующий началу профилактики, что позволило получить количественную оценку профилактического действия лития. Для этого у каждого больного регистрировали количество фаз и их суммарную длительность в период профилактики и за равный интервал времени до ее начала. Длительность профилактики составляла от 2 до 12 лет, в среднем 6,5 года. В этой группе было 138 мужчин и 112 женщин в возрасте от 16 до 90 лет. 229 из них страдали маниакально-депрессивным психозом и 21 циркулярной шизофренией. Результаты приведены в табл. 8.
Основной показатель, характеризующий тяжесть течения психоза, суммарное количество месяцев болезни уменьшился на 64,8 %, т. е. на 2/з. Суммарное количество приступов снизилось лишь на 40,3 %, но следует отметить, что в период профилактики мы учитывали даже самые слабые колебания настроения, не требующие медикаментозной терапии. Кроме того, у всех больных, положительно реагировавших на лечение, отмечалось уменьшение тяжести симптоматики в период приступов. Полное отсутствие терапевтического эффекта наблюдалось лишь у 24 больных (во всей группе из 350 человек), что составляет менее 7 %.
Профилактическое действие лития начинает проявляться обычно через несколько месяцев терапии. Приблизительно у 1/3 больных аффективные фазы полностью исчезают после начала профилактики. У остальных больных было установлено 3 типа редукции аффективной симптоматики.
Таблица 8. Суммарные результаты профилактики солями лития
В период профилактики
Первый, наиболее часто встречающийся, заключается в гармоничном смягчении всех симптомов депрессии и мании, в первую очередь аффективного напряжения. Постепенно фазы делаются более легкими и короткими, а в дальнейшем у большей части больных наступает их полное исчезновение. Иногда у больных с регулярным течением психоза в то время, когда должна была бы появиться депрессия, возникают лишь легкая вялость, неуверенность, повышенная утомляемость.
Второй тип распад целостной структуры депрессивной фазы: уже в первом, после начала лечения, депрессивном приступе появляются лишь отдельные редуцированные симптомы. Такие больные не жалуются на тоску, но отмечают нарушения сна, нежелание что-либо делать в первую половину дня, часто сохраняются отдельные второстепенные признаки, характерные для прошлых развернутых фаз. Например, один больной начинал носить старое, давно не употребляемое платье. При этом типе преобразования депрессивных фаз прогноз хуже, поскольку, несмотря на значительное смягчение симптоматики, полного прекращения приступов болезни обычно не наступает.
Третий тип редукции депрессивных фаз наблюдается значительно реже, как правило у больных с затяжными и тяжелыми депрессиями в прошлом и признаками органической недостаточности ЦНС. В этих случаях, наряду со смягчением депрессивной симптоматики, начинают появляться или делаться более длительными маниакальные состояния. Постепенно изменяется симптоматика депрессивных фаз: они начинают все более походить на смешанные состояния, появляются, наряду со сниженным настроением, раздражительность, обидчивость, идеи дурного обращения, исчезает заторможенность. Эти приступы начинают расцениваться близкими больного как маниакальные, хотя сам он продолжает жаловаться на плохое настроение. Характерно, что родственники некоторых больных с таким типом редукции депрессивной симптоматики просят прекратить лечение литием, хотя сами больные настроены на его продолжении. У одного такого больного, перенесшего в прошлом ряд травм головы и в детстве тяжелую корь с осложнениями, полностью исчезли ремиссии и в течение нескольких лет тянулась характерная мания с раздражительностью, обидчивостью и алкоголизацией при попытке выписки его из больницы.
Конечно, условием получения хорошего эффекта является проведение лечения солями лития с учетом всей полноты знаний о его действии. Общие принципы методики лечения солями лития не изменились за последние 5 лет и отражены во многих обобщающих публикациях. Повсюду в мире и у нас в стране дозы лития подбираются по содержанию его в плазме крови. До 19741975 гг. в зарубежной литературе рекомендовались концентрации от 0,6 до 1,4 ммоль/л. Считалось, что для обеспечения профилактического эффекта необходимо добиться наиболее высокой, но еще не вызывающей признаков интоксикации концентрации. Суточные дозы, обеспечивающие ее, отличаются у разных больных и зависят от скорости выведения лития из организма литиевого клиренса.
В обзоре 1983 г. М. Schou советует не превышать 0,8 ммоль/л лития в плазме, так как чем меньше концентрация, тем реже развиваются побочные нарушения в почках. Он же отмечает, что есть больные, которые не переносят содержания лития выше 0,4 0,6 ммоль/л, но для получения хорошего эффекта более высокая концентрация у них и не требуется. Однако существуют больные, у которых лечебный эффект при маниакальном состоянии наступает лишь при 0,8 1,1 ммоль/л лития в плазме крови. М. Schou считает, что концентрация выше 1,1 ммоль/л опасна, грозит тяжелыми осложнениями, а содержание лития менее 0,4 ммоль/л у большинства больных никакого действия на маниакальное состояние не оказывает.
Наши наблюдения полностью совпадают с этими данными: концентрация лития свыше 1 ммоль/л плохо переносится почти всеми больными и со временем обычно приводит к патологическим изменениям. Мы рекомендуем для профилактического лечения поддерживать содержание лития не более 0,6 0,7 ммоль/л и лишь при возникновении маниакального состояния повышать его до 0,9 1 ммоль/л, если это необходимо, но только на период мании. После ее купирования дозы снижаются, с тем чтобы концентрация не превышала обычные 0,6 0,7 ммоль/л.
Для детей, которые, как правило, обладают большей чувствительностью к побочному действию лития, достаточна его концентрация 0,4 0,6 ммоль/л.
Как известно, терапия солями лития должна начинаться либо в интермиссии, либо в мании, но не в период депрессивной фазы, которую она может иногда даже затягивать. При ее назначении в ремиссии необходимая концентрация лития достигается постепенным подбором доз препарата при частом определении его содержания в крови. Обычно первая суточная доза 0,3 г карбоната лития, затем через 2.. 3 дня ее повышают до 0,3 г дважды в день, далее до 0,9 г в сутки, пока не будет достигнута нужная концентрация. Уже при дозе 0,6 г карбоната лития необходимо исследовать его содержание в крови, прежде чем проводить дальнейшее наращивание дозы. Иногда для достижения необходимой концентрации приходится назначать 1,5 и даже 2,1 г в день. При этом следует отметить, что чем больше доза, необходимая для достижения требуемой концентрации, тем при прочих равных условиях прогноз профилактики хуже. В дальнейшем концентрация лития должна контролироваться. Нередко концентрация меняется при стабильной дозе препарата. Внезапное ее повышение может быть связано с нарушением функции почек, изменением в питании, дегидратацией, приемом других лекарств. При неожиданном подъеме концентрации необходимо установить, правильно ли проводился прием препарата, и если погрешностей не было (например, прием всего суточного количества за один раз накануне исследования), необходимо тщательно исследовать функцию почек. Значительное повышение концентрации при небольшом увеличении дозы также требует обследования почек.
В 19601970 гг. исследование концентрации лития в плазме считалось желательным, но не обязательным условием данного вида лечения. Однако тщательное исследование влияния лития на почки подтвердило, что побочного действия можно избежать, лишь удерживая концентрацию на минимальном эффективном для данного больного уровне. Поэтому исследования концентрации необходимо проводить не реже 1 раза в 2 мес.
Надо учитывать, что больные, в прошлом из-за аффективных приступов часто выбывающие из строя, много раз побывавшие в психиатрических больницах, очень ценят эффект лития, даже если он не приводит к полному исчезновению фаз, а только облегчает и урежает их. Они считают, что могут теперь обойтись без наблюдения диспансера, посещения врача и принимают дозу, которая была им назначена вначале. Со временем могут появиться признаки повышения концентрации лития в крови, но больные, поскольку они не увеличивали дозу, не связывают эти симптомы с препаратом и не принимают нужных мер.
Определение концентрации лития в плазме и даже эритроцитах вполне осуществимо в условиях города, где в одном или нескольких лечебных учреждениях имеются спектрофотометры. Мы наблюдаем группу больных (350 человек), которым концентрацию лития с 1967 по 1973 г. определяли в лаборатории НИИ эволюционной физиологии им. Сеченова (В. Г. Леонтьев), с 1978 г. в НИИ цитологии (С. И. Васянин). Из этих 350 лишь 250 человек все годы являлись для исследования достаточно часто, чтобы полученные данные можно было проанализировать.
Причины уклонения от обследования были разные. Больных не информируют достаточно полно, почему важно следить за концентрацией лития. Если нет выраженных побочных явлений, прием определенного числа таблеток становится привычкой и не беспокоит больного. Посещение диспансера, напоминание о прошлых болезненных приступах, госпитализациях является психотравмирующим фактором. Поэтому в целом больные нашей группы обследуются чаще, чем пациенты диспансеров. Это не только результат наших требований, но и следствие менее формальной обстановки взятия анализа.
В нашем «центре» больные, которым это удобнее, могут договориться о сдаче крови в вечерние часы (сделав перерыв в приеме лития, как это положено, в 10 12 ч). Ответ можно узнать по телефону на 2 или 3-й день; кроме того, он сообщается врачу, который делает вывод о дальнейшей дозировке. Около 100 больных из 350 делают анализ раз в 2..3 года. Это или те, кто освободился от аффективных колебаний совсем, или смирился с частичным профилактическим эффектом. Они не думают о том, что результаты могут быть лучшими, если постоянно регулировать содержание лития, или что они могут причинить вред своему здоровью, не узнав вовремя о повышении концентрации лития в крови.
Таким образом, организация лечения по данной методике играет большую роль в его эффективности и безопасности. Нам представляется, что для крупных населенных пунктов идеальным было бы создание специального центра. Важно, чтобы информация о реагировании больного на литий в начале курса, через год, через несколько лет собиралась в одном месте. Это имеет большое значение, так как отдельные показатели содержания лития в плазме без знания предыдущих цифр иногда могут не насторожить врача, поскольку они укладываются в рекомендуемые границы. Однако если у больного, принимающего 900 мг карбоната лития, концентрация лития в крови была 0,6 ммоль/л, а через несколько месяцев оказалась 0,8, то на это надо обратить внимание и исследовать почечную экскрецию. Приведем пример.
Больная И., 1924 года рождения, больна с 38 лет. Перенесла 3 депрессивные фазы по 7 8 мес, тяжелые, с тревогой, идеями малоценности и виновности. Литий принимает с 1968 г. После начала профилактики была одна короткая, маловыраженная фаза длительностью в 2 3 нед, лечилась амбулаторно. Прежде всегда много месяцев проводила в психиатрических больницах. После этой редуцированной фазы аффективных нарушений не было 15 лет, принимала 900 мг карбоната лития, концентрация его в крови составляла 0,66; 0,64; 0,66 ммоль/л. Побочных действий не ощущала, кроме незначительной жажды.
Больная много лет страдает гипертонической болезнью, бывают приступы стенокардии. Зимой 1983/84 г. развилось серьезное нарушение мозгового кровообращения. Лечение гипертензии и стенокардии согласовывала с психиатром, мочегонные средства, назначаемые терапевтом, были отменены, больная не меняла привычную для нее диету с достаточным количеством жидкости и соли сознательно, но в период плохого соматического состояния ела мало и, так как она одинока, перешла на готовые продукты питания: творог и кефир. Возможно, сыграла роль не только диета, но и изменение функции почек в результате длительной гипертензии. При очередном определении лития в плазме на прежней дозе 900 мг карбоната лития в сутки концентрация его составляла 1 ммоль/л. Стало понятно, почему, несмотря на снижение артериального давления, к этому времени не уменьшились тошнота и эпизоды головокружения.
Это пример того, как тщателен должен быть контроль за концентрацией лития у людей пожилого возраста, страдающих сопутствующими заболеваниями и ограничивающих в болезненном состоянии свое питание (в данном случае из-за чисто житейских трудностей). Несмотря на достаточную осведомленность этой больной о методе лечения и послушное выполнение назначений врача, мы несколько запаздывали, с изменением доз в силу опять-таки «технических» причин: данные о концентрации лишь на следующий день сообщались врачу, а изменение тактики лечения доходило до больной еще через день. По-видимому, если на изменившееся самочувствие больного реагировать моментально, можно значительно лучше справляться и с побочными действиями лекарств, и с рецидивами болезни. Этот случай еще раз показывает, как побочные влияния мешают удержать концентрацию лития на нужном уровне и соответственно как трудно добиться удовлетворительного результата профилактики без регулярного и оперативного определения лития в крови.
Что будет если принять литий
Литий – одно из наиболее хорошо изученных и часто применяемых лекарственных средств для лечения пациентов, страдающих биполярными расстройствами.
Атомно-адсорбционная спектрометрия (ААС).
Мкг/л (микрограмм на литр), ммоль/л (миллимоль на литр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Препараты, содержащие литий, являются одними из наиболее хорошо изученных и широко применяемых при лечении биполярных расстройств – психических заболеваний, которые характеризуются чередованием периодов депрессии и мании. Эти периоды могут длиться как несколько дней, так и несколько месяцев и даже лет. Состояние пациента колеблется от апатии до эйфории. Подвержены биполярному расстройству и взрослые, и дети.
Литий часто называют «стабилизатором настроения» и назначают обычно пациентам, не реагирующим на другие лекарства. Это сравнительно медленно действующий препарат, иногда может пройти несколько месяцев прежде, чем он стабилизирует психическое состояние.
Количество лекарства должно быть достаточным для создания в крови устойчивой концентрации лития, необходимой для лечебного воздействия. Эта дозировка для каждого пациента индивидуальна и зависит от возраста, общего состояния здоровья и от приема других лекарств.
Уровень лития следует проверять регулярно: если он будет слишком низким, лечение окажется неэффективным, а слишком высокий опасен отравлением с тошнотой, рвотой, диареей, помутнением сознания и дрожью. Очень большие концентрации лития могут привести к ступору, сердечным приступам и даже к летальному исходу.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Если уровень лития в пределах нормы, значит, лекарство оказывает лечебное действие без токсического эффекта.
Если концентрация лития в крови понижена, то, скорее всего, пациент не получает нужного количества лекарства, если выше и при этом есть побочный эффект – принимаемая доза слишком высока. Однако не следует уменьшать количество препарата либо прекращать его прием без консультации с доктором, так как это может осложнить заболевание. Лечение должен назначать врач: для каждого человека с учетом индивидуальных особенностей он подберет такую дозу, которая оказывает наиболее благоприятный терапевтический эффект.
Что может влиять на результат?
Теофиллин и кофеин понижают уровень лития.
Что будет если принять литий
ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия», Иваново
Российский сателлитный центр института микроэлементов ЮНЕСКО; Лаборатория вычислительной и системной биологии ВЦ РАН им. А.А. Дородницына; кафедра фармакологии и клинической фармакологии Ивановской государственной медицинской академии
ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет», Санкт-Петербург
Российский сателлитный центр института микроэлементов ЮНЕСКО; Лаборатория вычислительной и системной биологии ВЦ РАН им. А.А. Дородницына
НЦ неврологии РАМН
ФГБУ «Научный центр неврологии» РАН
ФГБУ «Научный центр неврологии» РАН
ГБАОУ ВПО «Московский физико-технический институт», Москва
Адаптогенные и нейропротективные свойства аскорбата лития
Журнал: Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2016;116(12): 86-91
Пронин А. В., Громова О. А., Сардарян И. С., Торшин И. Ю., Стельмашук Е. В., Остренко К. С., Александрова О. П., Генрихс Е. Е., Хаспеков Л. Г. Адаптогенные и нейропротективные свойства аскорбата лития. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2016;116(12):86-91.
Pronin A V, Gromova O A, Sardaryan I S, Torshin I Iu, Stel’mashuk E V, Ostrenko K S, Alexandrova O P, Genrikhs E E, Khaspekov L G. Adaptogenic and neuroprotective effects of lithium ascorbate. Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii imeni S.S. Korsakova. 2016;116(12):86-91.
https://doi.org/10.17116/jnevro201611612186-91
ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия», Иваново
Цель исследования. Изучение нейропротективных свойств аскорбата лития (АЛ) в моделях стресса in vivo и in vitro. Материал и методы. Нейроцитологические и поведенческие исследования на моделях стресса в культуре нервных клеток и у экспериментальных животных. Результаты. Показан выраженный нейропротективный эффект АЛ при цитотоксическом действии глутамата in vitro и его адаптогенный эффект при индукции стресса in vivo. Заключение. Результаты указывают на высокий нейропротективный потенциал АЛ в условиях стресса, индуцируемого in vivo и in vitro.
ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия», Иваново
Российский сателлитный центр института микроэлементов ЮНЕСКО; Лаборатория вычислительной и системной биологии ВЦ РАН им. А.А. Дородницына; кафедра фармакологии и клинической фармакологии Ивановской государственной медицинской академии
ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет», Санкт-Петербург
Российский сателлитный центр института микроэлементов ЮНЕСКО; Лаборатория вычислительной и системной биологии ВЦ РАН им. А.А. Дородницына
НЦ неврологии РАМН
ФГБУ «Научный центр неврологии» РАН
ФГБУ «Научный центр неврологии» РАН
ГБАОУ ВПО «Московский физико-технический институт», Москва
Стресс — состояние повышенного напряжения организма, возникающее при отсутствии адекватной адаптивной реакции на стимулы окружающей среды (стрессоры). В норме их воздействие вызывает мобилизацию адаптационных возможностей организма. Когда вследствие тех или иных причин сопротивляемость организма снижается, наступает так называемая стадия истощения (дистресс), затяжной период которого может вести к развитию различных хронических заболеваний [1].
Хронический стресс снижает жизнеспособность нейронов и ведет к нейродегенерации. Даже умеренный хронический стресс приводит к появлению таких признаков нейродегенерации, как нарушение синаптической передачи, накопление бета-амилоида и гиперфосфорилирование тау-белка [2—5]. Эти эффекты реализуются на фоне избыточной активации глутаматных NMDA-рецепторов, что приводит к эксайтотоксической гибели нейронов [6].
Одним из факторов, способствующих развитию стресса, является недостаточность микронутриентов, в частности лития. Литий — эссенциальный микроэлемент, необходимый для нормального функционирования нервной системы. Результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о его нейротрофических и нейропротективных эффектах. Применение препаратов лития повышает синтез нейротрофических факторов, препятствует гибели нейронов через модуляцию каскада апоптоза PI3K/Akt/GSK3. В очень малых дозах (мкг и мг) литий крайне важен как ион специфически (незаменимо) обеспечивающий активность молекулярных каскадов, которые способствуют ускорению роста нейронов и повышению их устойчивости к окислительному стрессу [7], улучшению пространственной памяти, предотвращению негативного влияния на нее хронического стресса [8]. Применение лития в безопасных малых дозах вызывает увеличение объема серого вещества мозга [9—11]. По нашим данным, аскорбат лития в 8,4 раза менее токсичен, чем неорганическая соль карбоната лития. Аскорбат лития характеризуется наилучшими параметрами острой токсичности: так, LD50 аскорбата лития для крыс Вистар составляет — 6334 мг/кг, что позволяет отнести субстанцию аскорбата лития к 5 классу «практически нетоксичных» веществ с LD50 ≥ 5000 мг/кг.
Цель исследования — изучение нейропротективных свойств аскорбата лития (АЛ) в моделях стресса in vivo и in vitro.
Материал и методы
Защитные свойства АЛ иссследованы in vivo на двухмесячных крысах линии Вистар в условиях транспортного и иммобилизационного стресса и in vitro в культуре зернистых нейронов мозжечка, подвергнутых цитотоксическому действию глутамата.
Исследования invivo
Задачей исследования являлась оценка защитных свойств парентерального введениия АЛ в различных дозах на моделях стресса. Было сформировано 5 групп по 36 животных в каждой, подобранных по принципу парных аналогов. За 7 сут до начала эксперимента животных выдерживали на карантине. Крысы всех групп содержались в стандартных условиях вивария в клетках по 18 животных. Корм — премикс ПЛЖ (в соответствии с ГОСТ Р 50258−92), подстилка — мелкая сухая стружка. 1-я группа — контроль (крысы получают воду); 2-я группа — АЛ вводился в дозе 120 мг/кг от массы тела; 3-я группа — АЛ вводился в дозе 60 мг/кг; 4-я группа — АЛ вводился в дозе 30 мг/кг; 5-я группа — интактные крысы (без модели стресса). АЛ в группах 2—4 вводили в одно и то же время, через 2 ч после утреннего кормления в виде раствора через зонд, в качестве растворителя использовали воду для инъекций («Буфус» Новосибхимфарм), объем введения — 1,5 мл. В группах 2−4 АЛ вводили в течение 3 нед. Еженедельно для определения защитного эффекта проводили тесты на подвешивание и имитацию транспортного стресса.
Тест подвешивания. Животное подвешивали на 24 ч, после завершения эксперимента из подъязычных сосудов в пробирку забирали цельную кровь. Для определения числа эозинофилов в цельной капиллярной крови по методу Дункера забор проводили после отсечения кончика хвоста. Метод основан на сохранении эозинофилов в растворе ацетона, при котором все остальные клетки крови разрушаются. Подсчет клеток проводили в камере Горяева не позднее чем через 30 мин после забора крови. Количество эозинофилов подсчитывали в 100 больших квадратах и умножали на 50, что соответствует их количеству в 1 мкл. В сыворотке крови определяли содержание адреналина и норадреналина, которые являются специфическими маркерами воздействия на стресс. По 6 отобранных животных из каждой группы помещали в эксикатор с диэтиловым эфиром и проводили спинальную декапитацию для обследования брюшной полости и подсчета количества язв на слизистой желудка.
Тест имитации транспортного стресса. Проводили на универсальном вращающемся шейкере Unimax-1010. На его площадке закрепляли клетку, в которую помещали 5 животных, находящихся в свободном состоянии. Последовательно проводили три эксперимента с интервалами в 7 сут, по 240 мин каждый, при скорости вращения 120 об/мин. По окончанию теста на основании описанных выше методик осуществляли изучение состояния организма животных. В сыворотке крови определяли содержание аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), креатинина (автоматический биохимический анализатор Konelab-20i, Финляндия—США).
Тест открытое поле (ТОП). Регистрировали горизонтальную и вертикальную двигательную активность, груминг, обнюхивание отверстий, дефекацию. Кроме того, наблюдали за такими моторными отклонениями, как шаткость походки, тремор и др.
Исследованияinvitro.
Использованы 7—8-суточные культуры, полученные методом ферментно-механической диссоциации клеток мозжечка 7-дневных крыс по ранее описанной методике [12]. Животных умерщвляли летальной дозой эфирного наркоза, после чего 5 мин стерилизовали 70% этанолом, извлекали мозжечок и переносили его в пластиковую чашку Петри с фосфатным буфером, лишенным ионов кальция и магния. Фрагменты ткани инкубировали 15 мин при 37 о С в фосфатном буфере, содержащем 0,05% трипсина, 0,02% ЭДТА и 0,8% глюкозы. После инкубации ткань промывали в двух сменах фосфатного буфера и один раз — в питательной среде культивирования, в которой затем подвергали механической диссоциации. В ее состав входило 90% среды «Игла», 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ глутамина, 5 мМ KCl и 10 мМ буфера Нереs, pH 7,2—7,4.
Суспензию клеток центрифугировали 1 мин при 1000 об/мин, супернатант удаляли, а осадок ресуспендировали в питательной среде. Культивирование проводили в 96-луночных пластиковых планшетах, покрытых полиэтиленимином или полилизином, где уровень хлорида калия был доведен до 25 мМ. В каждую ячейку планшета добавляли по 0,1 мл суспензии клеток.
Культивирование проводили 7—8 сут в инкубаторе, заполненном газовой смесью (95% воздуха и 5% СО2), при температуре 35,5 о С и относительной влажности 98%. К этому сроку культивированные зернистые нейроны (КЗН) достигают своей морфологической и нейрохимической зрелости. Состояние культур контролировали ежедневно путем визуального просмотра в инвертированном микроскопе при фазовом контрасте.
Раствор АЛ готовили из нового сухого вещества непосредственно перед внесением в среду культивирования. Раствор стерилизовали фильтрацией и добавляли в питательную среду на 2-е сутки in vitro на весь срок культивирования (до 7 сут). В части экспериментов АЛ добавляли в среду на 7 сутки in vitro, за 3 ч до воздействия глутамата. Были выбраны следующие его концентрации: 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мМ. Поскольку КЗН имеют рецепторы глутамата, а к 7-му дню in vitro происходит их созревание, их гиперстимуляция с помощью экзогенного глутамата вызывает гибель КЗН, что является удобной моделью нейродегенации [13, 14]. Глутамат (Sigma, USA, N. G-1626) при добавлении к культурам на 7-е сутки оказывал дозозависимый токсический эффект (рис. 1). Выбор концентрации проводили в каждом опыте таким образом, чтобы выживаемость КЗН составляла 30—80% от контроля. Такая выживаемость позволяет выявить действие различных веществ на процесс гибели клеток. При выживаемости менее 30% или более 80% нейропротективные эффекты могут не обнаружиться. Использовали подсчет клеток при действии потенциальных нейропротекторов, добавляя в питательную среду подобранные токсические концентрации глутамата (50—250 мкМ).
Рис. 2. Эмпирические функции распределения чисел выживших КЗН при различных концентрациях аскорбата лития (мМ). Тест Колмогорова-Смирнова.
На каждую точку брали по 3 культуры, в каждой из которых фотографировали и просчитывали последовательно по 5 полей зрения (45 полей из 9 культур в 3 независимых экспериментах), распределение переменных носило нормальный характер. Количество нейронов с неизмененной морфологией в контрольных культурах принимали за 100% выживаемости.
Для статистического анализа использовали тест ANOVA с поправками Бонферрони/Даннетта и непараметрический тест Колмогорова—Смирнова, который отличается высокой чувствительностью и применим для анализа выборок вне зависимости от условия нормальности распределения. Различия между группами считали достоверными при p 
Таблица 1. Количество язв желудка при проведении теста подвешивания Примечание. Здесь и в табл. 2: * — статистически достоверное различие с контролем по критерию Данна (p
Число эозинофилов в цельной крови и концентрации адреналина и норадреналина являются специфическими маркерами воздействия различных стресс-факторов. С возрастанием дистресса число эозинофилов падает (эозинопения — характерный биомаркер стресса), а адреналина и норадреналина — возрастает (стресс стимулирует секрецию катехоламинов симпатическими ядрами и корой надпочечников). Применение А.Л. приводило к сохранению пула эозинофилов (табл. 2) и снижению концентраций адреналина и норадреналина (табл. 3).
Таблица 2. Количество эозинофилов в цельной крови в тесте подвешивания (в мкл)
Таблица 3. Концентрация адреналина и норадреналина в сыворотке крови в тесте подвешивания (мкг/л)
Модель транспортного стресса. Применение А.Л. оказалось эффективным в условиях транспортного стресса, неестественного для животных и поэтому вызывающего у них выраженную поведенческую реакцию. При назначении препарата животные более активно стремились снизить неблагоприятные воздействия стресса и адаптироваться к меняющимся условиям: пытались найти место, наименее подверженное колебаниям, тесно группировались, чтобы колебания группы компенсировали колебания платформы аппарата.
Данные анализа крови и биохимические показатели подтвердили поведенческие критерии адаптогенной активности А.Л. Препарат способствовал сохранению пула эозинофилов в крови (табл. 4) и нормализации концентраций АЛТ и креатинина, что указывает на снижение степени отрицательного воздействия стресса на печень (табл. 5).
Таблица 4. Количество эозинофилов в цельной крови в модели транспортного стресса
Таблица 5. Влияние А.Л. на концентрации в крови АЛТ и креатинина в модели транспортного стресса
Таким образом, экспериментальные данные свидетельствуют, что при пероральном введении АЛ происходит быстрая, в течение первых 7 суток, адаптация организма к использованным моделям стресса. Минимальная доза препарата (30 мг/кг) существенно не уступает по эффективности более высоким дозам (60—120 мг/кг).
Для определения степени возбуждения крыс при дистрессе использовался ТОП. Непосредственно перед исследованием животные в течение 5 дней получали А.Л. Оказалось, что препарат дозозависимо улучшает показатели двигательной и исследовательской активности и снижает выраженность дистресса (табл. 6).
Таблица 6. Влияние А.Л. на поведение крыс в ТОП
Эксперименты invitro
Как показал анализ эмпирических функций распределения средних чисел с использованием теста Колмогорова—Смирнова, АЛ (без добавления глутамата) в диапазоне концентраций от 0,1 до 1,0 мМ нетоксичен для КЗН (рис. 2).
Эмпирические функции распределения чисел (тест Колмогорова-Смирнова) выживших КЗН при действии глутамата в отсутствие (Glu) и в присутствии (Glu+) аскорбата лития в диапазоне концентраций от 0,1 до 1,0 мМ. Показаны достоверные отличия для всех использованных концентраций аскорбата лития по сравнению с действием глутамата без добавления препарата. Указаны значения максимального отклонения «D», на основе которого рассчитывается статистическая достоверность отличий между функциями распределения.
При цитотоксическом действии глутамата (100 мкМ) АЛ в указанном диапазоне концентраций оказывал выраженный нейропротективный эффект. Анализ функций распределения средних чисел выживших нейронов при всех концентрациях АЛ показал достоверное отличие от результатов, полученных при действии только глутамата (рис. 3). Результаты применения АЛ даже в минимальной концентрации (0,1 мМ) приводили к достоверным отличиям (D=0,19; р=0,049). При повышении концентрации выраженность отличий увеличивалась (значения максимального уклонения D возрастали, а значения р — снижались), а при самой высокой концентрации (1,0 мМ) отличия между глутаматной токсичностью и контролем были на грани статистической значимости (D=0,17; р=0,059). Таким образом, АЛ во всем изученном диапазоне концентраций (0,1—1,0 мМ) повышал выживаемость нейронов при глутаматном стрессе.
Рис. 1. Влияние глутамата (Glu) на выживаемость культур (число морфологически неизмененных нейронов на фиксированных препаратах, окрашенных трипановым синим).
Анализ данных с использованием теста ANOVA показал, что выживаемость нейронов при цитотоксическом действии глутамата в присутствии АЛ в диапазоне концентраций от 0,1 до 1 мМ, начиная с концентрации 0,2 мМ, достоверно дозозависимо повышалась в среднем на 12% (рис. 4). При подсчете числа выживших КЗН на окрашенных препаратах (рис. 5) хорошо заметно, что присутствие в питательной среде АЛ препятствует их деструкции под воздействием глутамата.
Рис. 4. Нейропротективный эффект АЛ при цитотоксическом воздействии глутамата. Светлые столбцы — АЛ (0,1—1,0 мМ) в отсутствие глутамата, темные — в тех же концентрациях в присутствии 100 мкМ глутамата (Glu). К — контроль. Для каждого столбика подсчитано по 30 полей зрения. * — p
Рис. 5. Нейропротективное действие Ал при нейроцитотоксическом действии глутамата (100 мкМ, 24 ч) в культуре клеток мозжечка. КЗН указаны стрелками. Окраска фиксированных культур трипановым синим. Масштаб 1:0,000015.
Заключение
Полученные нами данные свидетельствуют о выраженных адаптогенных свойствах нетоксичной стандартизированной субстанции органической соли лития — аскорбата лития в условиях стресса, моделируемого in vivo и in vitro, и о тесной связи между стрессом и нейродеструктивными процессами на клеточном уровне. В экспериментах in vivo препарат способствовал сохранению пула эозинофилов и снижению уровня адреналина и норадреналина в крови, улучшал показатели адаптации животных в тесте подвешивании и ТОП в модели транспортного стресса. При цитотоксическом действии глутамата in vitro аскорбат лития во всем исследованном диапазоне концентраций (0,1—1,0 мМ) оказывал защитный эффект. Таким образом, результаты наших исследований расширяют представления о нейропротективном потенциале малых доз препаратов лития, показанном ранее в экспериментах на культурах клеток стриатума [15], гиппокампа [16, 17], неокортекса [17—19], мозжечка [20], а также при черепно-мозговой травме [21].